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                骨髓間充質幹細∩胞采集、分離純化與保存
                時間:2019-11-04 11:43:47  作者:微微  來源:《微創美容外科學》
                采集:用18號穿刺針穿刺∴,20ml註射器(內含肝素2000u)在髂前上棘抽取骨髓10ml。抽取骨髓時註意保持針頭斜面在骨髓內。迅速抽取骨髓並使其和肝素均勻,防止產生血凝塊。
                  1、采集:用18號穿刺針穿刺,20ml註射器(內含肝素2000u)在髂前上棘抽取骨髓10ml。抽取骨髓時註意保持針頭斜面在骨髓內。迅速抽取骨髓並使其和肝素均勻,防止產生血凝塊。
                  2、分離純化:經1200rpm離心10min,吸除上層脂肪組織,洗滌三次。在骨髓☆中註入密度為1.073Percoll分離液。室溫下3000g離心30min,有核細胞在分界面及上層液體中,紅細胞大部分在沈澱ω中。用兩〗倍體積的PBS稀釋,並再次離ω 心。將細胞重懸於低糖10%DMEM+FBS培養液中。調整細胞※密度為1.6*106個/cm2接種於培養瓶◎中。37℃,體積分數為√5%的CO2恒溫培養】箱中培養,72d後棄去未貼壁細胞,以後每3天」換液一次。當細◥胞匯合90%單█層細胞後,0.25%胰蛋白酶室溫消化傳代,離心(1000rpm,10min),棄上清,沈澱按1:1比例傳代。
                圖片來源於△網絡
                  3、保存:收集生長良好的≡細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數細胞濃度及凍前∮存活率。將細胞加入到含10%DMSO和30%血清的新◣鮮培養基中,用無菌塑料冷凍●保存管放入到程序降溫盒中,於-70℃經24h後轉入液氮保存。30d後,復蘇細胞,用椎╳蟲藍染色檢測細胞活性,於37℃、體積分數為5%的CO2培養箱中培養,每日倒置光學顯微鏡下觀察細胞生長情況(細胞生長狀態★及數量)。主要觀察指標:1)人骨髓間充質幹細胞▽的生長曲線分析;2)細胞冷凍機復蘇生長特性分析。
                關鍵字:間充質幹細胞
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