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                骨髓間充※質幹細胞采集、分離純∩化與保存
                時間:2019-11-04 11:43:47  作者:微微  來源:《微創美容外科學》
                采集:用18號穿刺忍者針穿刺,20ml註射器(內含肝素2000u)在髂前上棘抽内心发出了神情取骨髓10ml。抽取老大骨髓時註意保持針頭斜面在骨髓內。迅速抽取骨髓並使其和肝素均↘勻,防止產生血凝塊。
                  1、采集:用18號穿刺針穿说完之后刺,20ml註射器(內含肝素2000u)在髂前上棘抽取骨髓10ml。抽取骨髓時註意保持針頭斜面在骨髓內。迅速抽取骨髓並使其和肝素均勻◥,防止產生血凝塊。
                  2、分離純化:經1200rpm離心10min,吸除上№層脂肪組織,洗滌三次。在骨髓后面中註入密度為1.073Percoll分離液。室溫下3000g離心30min,有核細胞在分界面及上層液體中,紅細胞大★部分在沈澱中。用兩倍體積的这种事情PBS稀釋,並再次離心。將細胞重懸於低糖10%DMEM+FBS培養液中。調整細胞密度為1.6*106個/cm2接種於培養瓶中。37℃,體※積分數為5%的CO2恒溫培藤原又是一声大喝養箱中培養,72d後棄去未↘貼壁細胞,以後每3天換液▓一次。當細胞匯〖合90%單層「細胞後,0.25%胰蛋白酶室溫消化傳孙杰代,離心(1000rpm,10min),棄上清,沈澱按1:1比例傳代。
                圖片來源於網【絡
                  3、保存:收集生長良好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數細胞濃度及凍前存╲活率。將細胞加心里一下咯噔入到含10%DMSO和30%血清的新鮮培養基中,用無菌我可以走了吗塑料冷凍保存管放入到程序降溫盒中,於-70℃經24h後轉入液氮保存。30d後,復蘇細胞,用椎蟲藍染色檢測細胞☆活性,於37℃、體積分撇开这个美女是个恶心數為5%的CO2培養箱中培養,每日倒置光學顯微鏡下觀察那道水符箭細胞生長情況(細∏胞生長狀態及數量)。主要觀察指她看到了標:1)人骨髓間充質幹細胞的生長曲線分析;2)細胞冷凍機笑着说道復蘇生長特性分析。
                關鍵字:間充質幹細胞
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